通过同源介导a-淀粉酶基因扩增改良地衣芽孢杆菌a-淀粉酶生产菌株

地衣芽孢杆菌高温a-淀粉酶(bla)是淀粉水解与生物加工过程中重要关键酶制剂之一。为了进一步提高地衣芽孢杆菌高温a-淀粉酶生产菌株的生产性能,本研究构建了一种含有地衣芽孢杆菌高温a-淀粉酶编码基因amyl的整合性重组质粒pbl-amyl。将重组质粒pbl-amyl转化入bla工业生产菌株bacilluslicheniformisb0204,再在卡那霉素存在下介导其b.licheniformisb0204染色体中的同源整合与高温a-淀粉酶编码基因amyl的扩增,由此获得了携带多个amyl拷贝的转化子。对转化子的amyl拷贝数及其bla发酵水平分别用荧光实时定量pcr及摇瓶发酵试验进行评价与鉴定。与出发菌株b0204相比,含2~5倍amyl拷贝数的重组菌的bla的合成水平显著提高。其中,重组菌rebl18生产bla的水平提高了89.2%。