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生物工程学报 2009
羊朊毒体单抗结合表位分析, PP. 348-353 Keywords: prp核心片段,人工合成多肽,单抗,抗原结合表位,融合蛋白,羊痒病,牛海绵状脑病 Abstract: 通过分段表达prp核心片段和人工合成多肽,分析5株羊朊毒体单抗结合表位。分段表达prp核心片段,通过pcr方法扩增目的片段,经酶切、连接后,将目的片段插入质粒pet32a,在大肠杆菌bl21中表达。将表达的系列融合蛋白与单抗进行免疫转印试验,根据反应情况确定单抗结合的大致部位,在此基础上设计合成多条针对性多肽,用elisa方法进一步确定3株单抗的结合部位;通过与6段融合蛋白反应证明5株单抗的结合部位分别为:2h3在199aa~213aa之间,4c6、5f11和7f11在139aa~168aa之间,7f1在214aa~227aa之间,与3段人工合成多肽进行elisa反应进一步得到4c6、5f11和7f11抗原结合表位在149aa~158aa之间;本研究确定了5株单抗在prp分子上的结合部位,为羊痒病和牛海绵状脑病的检测、发病机制的研究奠定了基础。
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