人纤溶酶原k1-3基因的克隆、表达和产物的纯化及抗癌活性分析

纤溶酶原k13功能区是近年发现的血管生成抑制因子，具有抑制肿瘤生长和转移的活性。以人血管生成抑制素cdna为模板用pcr技术扩增了k13功能区的基因，dna序列分析后克隆至质粒ppic9k上获得重组质粒ppic9k13，转化毕节酵母gs115，用pcr和g418法筛选高拷贝转化子，进行摇瓶发酵。sdspage和westernblot分析结果证实k13基因已在gs115分泌表达，并具有免疫活性。选用30l和80l罐进行高密度发酵，甲醇诱导48h细胞密度达到od250～300，比摇瓶提高5～6倍，表达量150200mg/l。发酵上清液经streamlinesp离子交换及phenylsephorose疏水层析纯化，在sdspage上显示一条带，纯度96%，动物实验证明纯化产物具有抗血管生成和抗肿瘤的活性。