重组猪卵透明带抗原pzp3α在毕赤酵母中的分泌表达

为制备rpzp3α蛋白供发展避孕疫苗研究，将编码天然提取pzp3α上的dna序列（446～1423）插入至毕赤酵母分泌型表达载体ppiczαa上，重组质粒ppiczαapzp3α线性化后通过电穿孔转入毕赤酵母gs115，经抗生素zeocin筛选获得工程菌。在2l发酵罐中，用甲醇诱导工程菌进行高密度发酵生产rpzp3α。分离浓缩发酵上清液，通过螯合铜离子的亲和柱纯化rpzp3α，用sdspage和westernblot进行鉴定，以quantityone软件对rpzp3α进行定量分析并计算纯度和回收率。用rpzp3α免疫家兔，以elisa法和间接免疫荧光法检测抗血清对rpzp3α和猪卵透明带的抗体反应。获得了分泌表达rpzp3α的工程菌，其高密度发酵产物经分离纯化后获得能与抗pzp3抗体反应的46kd成分，命名为rpzp3α，平均产量为8mg/l,纯度达92%，回收率为63%。用其免疫家兔获得抗rpzp3α抗血清，elisa测定显示能与rpzp3α和天然提取pzp3反应。间接免疫荧光法分析显示抗rpzp3α抗血清能与猪卵透明带反应，产生亮绿荧光。用酵母表达系统成功表达了rpzp3α，该蛋白保留有天然pzp3的免疫活性。