可溶性三聚化cd40-异亮氨酸拉链融合蛋白的制备及鉴定

以克隆的cd40cdna为模板，经多步pcr构建羧基端融合异亮氨酸拉链(isoleucinezipper,iz)三聚化基序和his6标签的可溶性cd40融合蛋白(scd40iz)的原核表达载体，在大肠杆菌中获得高效表达，分子量为27kd,与理论大小相符，表达产物主要存在于包涵体中，对包涵体蛋白进行稀释复性和纯化得到可溶性的scd40iz重组蛋白，该蛋白在溶液中的分子量为91kd，表明最有可能以三聚体形式存在。活性分析显示该蛋白能够与细胞上的cd40l结合，并且其结合活性与不含iz基序的可溶性cd40相比明显提高。这些结果表明，在可溶性cd40羧基端融合iz基序能够促进形成三聚体，并且具有增强的配基结合活性。