人孤儿受体gpr81分子克隆、组织分布及表达工程细胞株的建立

采用pcr技术分别从人全血基因组dna及引产胚胎肾组织cdna中扩增得到gpr81的全长cdna序列(1041bp)，运用生物信息学手段绘制该基因的分子进化树，显示该基因的氨基酸序列与烟酸受体同源性最高；然后，采用rt-pcr法分析该基因表达的组织分布，组织表达谱显示该基因在多种组织均有表达，以心脏及肝脏组织为最高；利用分子克隆手段构建含6×组氨酸（his）标签蛋白的真核表达载体pcdna3.1(-)/hismyc-a-gpr81，通过脂质体介导，将该重组质粒转染cho-k1细胞，rt-pcr证实该基因已整合入cho-k1细胞的基因组中，westernblot表明gpr81在cho-gpr81工程细胞株中有表达。组织表达谱的检测和工程细胞株的建立为进一步研究该受体的生物学功能奠定了基础。