人白细胞介素26的基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

克隆人白细胞介素-26（humaninterleukin-26,hil-26）基因，构建高效稳定的大肠杆菌表达菌株。对genbank上报道的hil26基因进行序列分析后设计合成引物，利用rt-pcr技术从人外周血单个核细胞(pbmc)总rna中反转录并扩增得到人成熟肽il-26基因。将得到的基因克隆到pmd18-t载体中，菌落pcr筛选、酶切鉴定并进行dna序列分析。用bam-hi和ecorⅰ将目的片段切下，插入表达载体pbv220相应的位点。42℃热诱导表达目的蛋白，sds-page分析显示表达蛋白约占菌体总蛋白的20%，western印迹法证实重组蛋白为特异性蛋白，分子筛纯化后纯度达90%以上。表达的重组蛋白经谷胱甘肽复性缓冲液复性，用rt-pcr检测复性的重组蛋白能促进pbmc合成ifn-γ。