含2a片段的重组黄热病毒17d疫苗表达载体的构建

黄热疫苗是一种减毒的黄热病毒17d（yf-17d）活疫苗，是现有疫苗中最安全、最有效的疫苗之一，适于发展为疫苗载体。用rt-pcr法扩增出覆盖yf17d全长基因组的3个cdna片段：5′cdna（a）、3′cdna（b）和中间cdna（c），同时引入sp6增强子序列、酶切位点和重复序列。顺序将a和b同e.coliyeast穿梭质粒prs424连接，再与c共转染酵母菌，利用缺少色氨酸和尿嘧啶的选择性固体培养基筛选出含yf-17d全长基因组的cdna质粒。以该质粒为模板，经过dna重组和酵母同源重组，获得含有口蹄疫病毒蛋白水解酶2a片段的重组yf-17d表达载体。将该表达载体体外转录后，电击转染bhk-21细胞。间接免疫荧光检测结果表明，rna转录体在bhk-21细胞中进行了稳定的表达；滴度测定与形态学观察结果表明，重组病毒在细胞中的生长曲线等特征同母本yf-17d十分相似。结果提示，利用酵母菌同源重组在2a部位引入异种抗原基因，重组yf-17d表达载体prs-yf-2a1具有成为高效活疫苗表达载体的潜力。