禽流感病毒h5ha、h7ha、h9ha亚型血凝素基因在毕赤酵母中的表达

利用毕赤酵母表达系统进行了禽流感病毒h5ha、h7ha及h9ha亚型血凝素基因的真核表达研究。首先将h5ha、h7ha及h9ha基因片段分别插入酵母分泌型表达载体ppic9k中，获得重组质粒ppic9k_h5ha、ppic9k_h7ha和ppic9k_h9ha；再将所获重组质粒分别经sacⅰ、bglⅱ及salⅰ线性化后，电转化gs115感受态细胞，以插入/替换的方式进行重组，并经md平板与mm平板筛选，及pcr鉴定，得到重组酵母工程菌gs115/ppic9k_h5ha、gs115/ppic9k_h7ha及gs115/ppic9k_h9ha；用甲醇诱导分泌表达目标蛋白。经sds_page和western_blotting检测，结果表明，h5ha、h7ha及h9ha蛋白在毕赤酵母中均获得表达。酵母表达了上述目的蛋白，可直接进行抗原检测，并可用于抗体检测试剂盒及亚单位疫苗制备的辅助研究。