栓菌漆酶在毕赤酵母中高效表达及重组酶的性质

栓菌420（trametessp.420）漆酶基因lacd以两种方式在巴斯德毕赤酵母（pichiapastoris）进行异源表达，产生两种重组漆酶：rlacdx（具有天然n-末端）和rlacde（n-末端带有8个额外的氨基酸残基）。摇瓶发酵18d，rlacdx和rlacde的产量分别为1.21×105u/l、7.38×104u/l［以2,2′-连氮-3-乙苯-二噻唑-6磺酸（abts）为底物］。在高密度发酵条件下，rlacdx的产量增加到2.39×105u/l，同时其生产周期降至7.5d。两种重组酶对愈创木酚底物的氧化特性相似，且在50℃和ph3～10的范围内均稳定。然而，rlacdx对底物abts的比活力（1761u/mg）高于rlacde（1122u/mg），其表观km值(427μmol/l)低于rlacde(604μmol/l)。