蜂房哈夫尼菌植酸酶基因appa的克隆、表达及酶学性质研究

从蜂房哈夫尼菌（hafniaalvei）中克隆获得一个植酸酶编码基因appa,该基因全长1335bp，编码444个氨基酸，其中前33个氨基酸为信号肽，成熟蛋白的理论分子量为45.2kd。将基因appa克隆到大肠杆菌e.coli表达载体pet-22b(+)，并在大肠杆菌中表达,表达产物具有植酸酶活性。对表达的酶蛋白进行纯化，并初步研究了该酶的酶学性质，结果表明：酶的作用最适ph值为4.5；在ph2.0～10.0范围内,酶活性保留80％以上；酶的作用最适温度为60℃；酶的比活性为356.7u/mg，酶动力学分析表明其k,/i>m为0.49mmol/l，vmax为238u/mg；该酶对胰蛋白酶和胃蛋白酶有一定的抗性。该研究为哈夫尼菌属来源植酸酶的首次报道。