柔嫩艾美耳球虫孢子发育阶段虫体抑制性消减文库的构建

为了分离鉴定柔嫩艾美耳球虫（eimeriatenella）孢子发育阶段虫体的差异表达基因，分别以柔嫩艾美耳球虫未孢子化卵囊和孢子化卵囊为驱动组、子孢子为实验组，或未孢子化卵囊为驱动组、孢子化卵囊为实验组，利用抑制性消减杂交（ssh）技术，构建了2个子孢子cdna消减文库和1个孢子化卵囊cdna消减文库。随机从3个cdna消减文库中分别挑取50个克隆，经pcr鉴定2个子孢子cdna消减文库的重组率都为96%，孢子化卵囊cdna消减文库的重组率为98%。从每个文库中随机挑取50个克隆测序，并进行同源性比较分析，结果显示：从孢子化卵囊cdna消减文库中获得了13个单一有效序列，其中8个est与已知蛋白同源性很高；从2个子孢子cdna消减文库中共获得了40个单一有效序列，其中9个est与已知蛋白同源，其余可能为柔嫩艾美耳球虫的新基因。这些结果为分离柔嫩艾美耳球虫新功能基因和进一步探索防治球虫病的方法提供了理论基础。