西瓜花叶病毒hc-pro基因在毕赤酵母中的分泌表达与功能研究

利用rt-pcr方法扩增出西瓜花叶病毒hc-pro的基因，长度为1371bp，并构建了真核表达质粒ppic9k-whc。将重组质粒经salⅰ单酶切后电转化pichiapastorisgs115菌株，经pcr鉴定与g418、md和mm培养基筛选，获得mut+/his+表型高拷贝转化子。经1%甲醇诱导5d后，sds-page检测发酵液上清，在66kd处有一特异蛋白条带表达。westernblot鉴定表明，表达蛋白可以和hc-pro蛋白抗血清发生结合反应。far-westernblot证明该蛋白能与西瓜花叶病毒cp蛋白结合，支持了hc-pro蛋白协助传毒的“桥梁”学说。