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生物工程学报 2007
人小肠三叶因子在毕赤酵母中克隆表达及对肠粘膜修复作用的研究Abstract: 为了研究人肠三叶因子(hitf)对肠粘膜的保护作用,利用rt-pcr从肠粘膜中扩增出hitf基因片段,与诱导分泌型毕赤酵母载体ppic9连接构建了重组质粒ppic9hitf,重组质粒转化至宿主菌gs115,经过pcr鉴定和转化子发酵筛选,得到一个重组毕赤酵母高产菌株gs115/ppic9hitf。在5l发酵罐中用基本盐培养基培养重组菌株,添加甲醇诱导表达hitf,离心收集的上清液通过离心交换层析纯化得到hitf。质谱鉴定结果表明纯化的hitf与天然提取产品在n端序列上完全相同。细胞实验和动物实验结果表明重组hitf能够促进细胞迁移,并可以保护肠粘膜免受有害因子的侵袭,保持了较好的生物学活性。
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