鸡氨肽酶n的高效可溶性表达及生物学功能分析

本研究旨为克隆鸡氨肽酶n(chapn)基因，高效表达可溶性目的蛋白，并测定其生物学功能。应用rt-pcr方法从鸡胚肾细胞中克隆chapn的基因片段，经测序鉴定后再克隆至原核表达载体pcold-tf，构建重组原核表达质粒pcold-tf-chapn，在大肠杆菌bl21(de3)中经不同条件诱导表达目的蛋白；利用镍柱亲和层析法纯化可溶性蛋白，并进行sds-page、westernblotting鉴定；leu-pna酶促反应和elisa等方法检测目的蛋白生物学功能。结果显示，重组质粒pcold-tf-chapn在大肠杆菌中以可溶形式高效表达；酶促反应及elisa结果显示该蛋白具有酶活性，可结合传染性支气管炎病毒(ibv)，并表现为剂量依赖性。这为今后研究chapn的酶活性、作为ibv受体及抗病毒功能奠定了实验基础。