socs3基因重组腺病毒的构建及其在猪脂肪细胞中的表达

本研究旨在构建细胞因子信号转导抑制因子3(suppressorofcytokinesignaling3，socs3)的重组腺病毒表达载体，获得有感染性的病毒颗粒。以pcdna3-socs3质粒为模板扩增socs3基因，将其亚克隆至腺病毒穿梭载体padtrack-cmv，经测序验证后，重组的穿梭质粒用pmei酶切线性化后转化到bj5183感受态细菌中与其内的骨架载体padeasy-1进行同源重组，获得的重组质粒pad-socs3，经paci线性化后转染至hek293细胞中进行包装和扩增，纯化后用tcid50法测定病毒滴度。以重组的病毒感染原代培养的猪脂肪细胞后，荧光显微镜下观察报告基因gfp的表达，rt-pcr和westernblotting检测细胞内socs3mrna和蛋白的表达。重组腺病毒载体pad-socs3经酶切及pcr鉴定正确，病毒滴度为1.2×109pfu/ml；感染原代培养的猪脂肪细胞后，荧光显微镜观察可见报告基因gfp的表达；rt-pcr和westernblotting检测到细胞中socs3mrna和蛋白的表达显著提高。本研究成功构建了socs3基因的重组腺病毒，感染原代培养的猪脂肪细胞可稳定表达socs3蛋白，为深入研究socs3的功能奠定了基础。