蓝藻抗病毒蛋白-n基因的克隆、表达、纯化及活性鉴定

蓝藻抗病毒蛋白-n(cyanovirin-n，cvn)具有强效抗hiv及其他包膜病毒活性，该蛋白序列特殊，难以重组制备，在大肠杆菌细胞质中形成包涵体。本研究根据大肠杆菌密码子偏好性对cvn原始核苷酸序列进行优化，通过多次pcr合成sumo-cvn的全长dna序列，构建pet3c-sumo-cvn重组表达质粒，重组质粒转化大肠杆菌bl21(de3)，获得表达菌株。通过对诱导剂浓度和诱导时间的优化，发现以0.5mmol/liptg在20℃诱导24h可获得最高表达，sds-page结果显示，sumo-cvn为可溶性表达，表达量占菌体总蛋白的28％；经特异性的sumo蛋白酶对融合蛋白进行酶切及两步ni-nta凝胶亲和层析可以得到纯度较高的重组cvn蛋白。elisa结果表明，重组蛋白cvn与gp120蛋白有较高的亲和力。体外抗病毒活性实验表明，重组蛋白cvn在纳摩尔浓度具有很好的抗hsv-1和hiv-1/ⅲb活性；这为开发基于cvn的新型、高效抗病毒药物打下了基础。