不同长度茎部shrna表达载体构建与鉴定

本研究针对同一目的基因设计构建不同茎部长度的shrna表达载体，并对其在细胞及胚胎水平的干扰效应做一比较。以绿色荧光蛋白基因为沉默效应的靶基因，设计茎部长度分别为21bp、27bp、29bp的干扰片段，退火后连入带有h6启动子的真核表达载体psistrike中(分别命名为egfp-21sirna、egfp-27sirna和egfp-29sirna)，将构建成功的载体以脂质体法转染小鼠胚胎成纤维细胞，利用荧光定量pcr对其荧光表达进行精确定量。不同茎部长度的shrna载体均使绿色荧光蛋白基因表达降低，茎部为29bp时比21bp、27bp表现出更明显的沉默效应。细胞水平沉默效应的初步验证，为筛选适合小鼠个体水平的最佳发夹结构奠定了基础。