青霉素酰化酶操纵子为负调控模型

质粒pbr322用hindⅲ—barnhⅰ双酶切作为载体，从质粒ppad上克隆含有pac操纵基因的hindⅲ一。bglⅱl．65kb的dna片段，得到质粒ppa41。质粒pbr322和ppa41转化染色体上含有完整pac操纵子的大肠杆菌d816，进行操纵基因滴定。大肠杆菌d816、d816(ppa4l)．d816(pbr322)在22℃摇瓶发酵96h，nipab法测定青霉素酰化酶活性。结果发现，在不加诱导剂时，d816(ppa41)产生的青霉素酰化酶是d816细胞的2．5倍，在加诱导剂时，d816(ppa41)产生的青霉素酰化酶是d816细胞的1．3倍。对照组d816(pbr322)细胞产生的青霉素酰化酶和：d816细胞产生的几乎一致，说明质粒ppa41的竞争滴定作用确是其上克隆的操纵基因引起的。高拷贝的操纵基因(ppa41)和pac操纵子竞争结合调节蛋白，使得pac操纵子表达增加，说明调节蛋白在pac操纵子表达过程中起阻遏作用，调节蛋白为阻遏蛋白，pac操纵子为负调控模型。r．na—dna点杂交检测pac基因表达，发现d816(ppa41)细胞转录产生的pac—mrna量明显高于d816细胞，mrna量和青霉素酰化酶活性呈现一致的趋势，证实了pac操纵子的负调控发生在转录水平。