日本血吸虫中国大陆株雌、雄成虫cdna文库的构建

用trizol试剂盒分别提取日本血吸虫中国大陆株雌、雄成虫总rna，oligo(dt)纤维素柱纯化mrna，反转录合成第一链cdna，完成第二链cdna合成后，凝胶电泳回收500bp以上的片段并过柱纯化后，与载体λziplox连接。体外包装后分别得到雌、雄成虫cdna噬菌体表达文库。经测定雌、雄文库容量分别为3.74×106、3.28×106，重组比率均在96%以上，插入片段长度多在1kb左右。通过pcr技术，我们从文库中钓取到egp、23kd膜蛋白、actin和gcp的cdna，其中gcp基因为低丰度表达基因。各项指标表明，我们成功构建了高质量的cdna文库，可作为研究雌雄成虫基因差异及筛选保护性抗原基因的重要资源。