重组人flt3配体的克隆、表达及功能鉴定

通过克隆人flt3配体(rhfl)基因，建立其原核高效表达系统，为大规模获得rhfl产品，促进干细胞体外扩增移植等新技术在临床的应用创造条件。分离人外周血单个核细胞，提取总rna，采用rt-巢式pcr扩增可溶型fl基因，以双脱氧终止法进行dna序列分析；将目的基因与pproexht载体连接，重组体引入大肠杆菌并在iptg诱导下表达；亲和层析纯化表达产物，观察其刺激cd34+细胞增殖的情况。从人外周血单核细胞中克隆得到长481bp的rhfl基因，测序结果与已知人fl基因序列一致；rhfl的表达量约占菌体蛋白总量的15%，经亲和纯化纯度达90%以上；rhfl+g-csf+epo刺激cd34＋细胞增殖约400倍。获得了rhfl基因及其在大肠杆菌中的高效表达，初步建立了产物纯化途径，纯化后的rhfl具有较强的刺激造血干/祖细胞增殖的能力。