多孔微载体无血清培养rcho细胞生产u-pa

在30l搅拌式反应器中无血清培养分泌尿激酶型纤溶酶原激活剂(u-pa)的dna重组cho细胞，定期部分更换cytopore多孔微载体，使生长在多孔微载体中的细胞不断更新繁殖，解决大规模细胞培养中的细胞凋亡问题。在91d连接换液培养过程中，细胞密度可维持在(1.3～2.6)×107/ml，活细胞比率维持在90%以上。在7.5l搅拌罐中培养细胞，利用外部周期性压力振荡刺激并结合载体更新技术，可减轻密度效应对细胞生长和表达的影响，在一定程度上提高细胞在高密度培养条件下的表达水平。在67d连续换液培养中，细胞最高密度为2.64×107/ml，活细胞比率维持在95%以上。与稳压操作相比，利用周期变压刺激技术可提高产量10%～20%，且可降低葡萄糖厌氧代谢生成乳酸的转化率，利用4步纯化工艺，从含u-pa约135g的2100l上清中获得约80gupa(单链比例约为90%)。