粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子/白细胞介素-3融合蛋白的表达研究

利用pcr扩增得到粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf)、白细胞介素-3(il-3)完整基因片段，将其分别克隆至pgem-t，构建成gmcsf/il-3融合蛋白基因，dna序列与设计预期一致。将得到的融合蛋白基因克隆至t7rna聚合酶表达载体pt7zz，得到表达质粒pfu，经转化至表达宿主e.colibl21(de3),在iptg诱导下获得融合蛋白目的产物的直接表达。经sds-page电泳鉴定扫描分析，目的基因产物表达量占菌体总蛋白量的30%以上，目的基因表达产物以包涵体的形式表达。westernblot鉴定表明，该表达产物可以与gm-csf抗体及il-3抗体特异性结合。目的基因表达产物经过包涵体变性、透析复性及柱层析纯化，用gm-csf、il-3依赖细胞株tf-1检测，具有明显的生物学活性。