重组点状产气单胞菌脯氨酰内肽酶的纯化和鉴定

报道重组点状产气单胞菌脯氨酰内肽酶(简称appep)的基因工程下游工艺研究。工程菌株e.colibl21/pkkh\|pep表达产物appep为可溶性蛋白，在nbsbioflo3000型5l自控发酵罐中经14h培养每升发酵液可达到22.5g干重菌体，含appep3.0g左右。发酵菌体经超声破碎、硫酸铵沉淀后，依次经sephadexg-25、highperformanceqsepharoseff(hp\|q)、phenylseparose6ff柱层析分离纯化，每升发酵产物最终可得0.86g纯度达96%的重组appep，比活力达到65.5u/mg，整个纯化工艺的蛋白回收率为8.2%，活力回收率为24.4%。纯化的appep经电喷雾质谱测定分子量为76464±30d，n端氨基酸序列与基因序列推导的一致。等电点为pi6.0左右。与aeromonashydrophila来源的pep(pi=5.5)相近。