蛇神经毒素的表达和鉴定

抽提中华眼镜蛇毒腺总rna，通过反转录pcr扩增cobrotoxincdna,克隆并测序。该cdna编码83个氨基酸，包括21个氨基酸的信号肽和62个氨基酸的成熟蛋白。该成熟蛋白的氨基酸序列和通过蛋白测序从台湾眼镜蛇鉴定的cobrotoxin完全一致。pcr扩增编码cobrotoxin的dna，并亚克隆到表达载体pmal-p2。此外，通过合成寡核苷酸片段，拼接成完整的cm11基因，并将其克隆至pmal-p2。经iptg诱导，两种神经毒素基因在大肠杆菌中都得到高效的可溶性融合表达。表达产物通过sds-page和蛋白印迹杂交加以鉴定。表达的融合蛋白经过sepharose6bamylose亲和色谱和deaesepharoseff离子交换色谱得到有效纯化。经xa因子酶切后得到的两种重组神经毒素都具有小白鼠体内毒性。