碱性蛋白酶工程菌发酵条件及重组酶的纯化和性质的研究

在5l发酵罐中对重组碱性蛋白酶工程菌株bp071高产碱性蛋白酶的条件进行了研究，通过提高通气量和改变搅拌转速，bp071可在发酵40h内达到产酶高峰，酶活力最高可达24480u/ml。利用快速蛋白液相层析（fplc）技术，建立了快速高效纯化碱性蛋白酶的方案。发酵液通过硫酸铵沉淀、deae-a-50脱色及聚乙二醇浓缩得粗酶，再经过cm-sephadex-c-50、sephadex-g-75柱层析后得到了单一组份的重组碱性蛋白酶，酶纯度提高了76.2倍。sds-page显示重组碱性蛋白酶分子量为28kd。酶学性质研究表明，酶的最适作用ph为11，最适作用温度为60℃，具有良好的ph稳定性和热稳定性。ca2+、mg2+对酶的稳定性有促进作用，hg2+、ag+、pmfs和dfp能强烈抑制酶的活力。sds和urea对酶的活力无影响。