苏云金杆菌vip3a基因的克隆、表达及杀虫活性分析

用全长pcr方法从野生型苏云金杆菌（bacillusthuringiensis，bt）菌株s184中克隆了2.3kb大小的vip3a基因并进行了序列分析。将vip3as184基因插入表达载体pqe30构建了表达质粒potp，转化大肠杆菌m15，转化子经1mmol/liptg诱导后可表达89kd大小的vip3a-s184蛋白，并得到westernblot证实。蛋白可溶性试验表明，目的蛋白中约有19%是可溶的，用透射电镜观察到大多数蛋白是以包涵体形式存在的。因此，可以在自然条件下进行目的蛋白的纯化和对家兔进行免疫制备多克隆抗体，用于苏云金杆菌vip3a蛋白表达的检测。利用iptg进行诱导培养的菌液对甜菜夜蛾（spodopteraexigua）、斜纹夜蛾(s.litura)和棉铃虫(helicoverpaarmigera)等3种害虫的初孵幼虫进行生物测定，结果表明，vip3as184蛋白对夜蛾科害虫具有较高的杀虫活性。