大肠杆菌cmp-唾液酸合成酶最小活性域的研究

比较大肠杆菌与脑膜炎奈瑟氏球菌的cmp-唾液酸合成酶的氨基酸序列，发现大肠杆菌cmp-唾液酸合成酶的保守区域主要位于n-端，其c-末端似乎对其催化活性没有作用。通过pcr方法，对大肠杆菌cmp唾液酸合成酶的c-末端进行了一系列截短，将得到的产物连接至表达载体pet-15b中，在大肠杆菌bl21(de3)plyss中表达。经iptg诱导，发现从c-末端截去189个氨基酸酶仍有催化活性，说明大肠杆菌cmp唾液酸合成酶的最小活性域主要集中在n-末端的229个氨基酸。有催化活性的c-端缺失突变合成酶的比活、最适ph及热稳定性发生变化，提示被截去的c-端氨基酸残基虽不直接参与构成酶的催化活性中心，但可影响催化活性域的构象，从而对酶的催化活性与稳定性产生影响。