头状链轮丝菌染色体复制起始区的克隆和对变铅青链霉菌的转化

头状链轮丝菌(streptoverticillumcaespitosus)atcc27422是抗肿瘤药物——丝裂霉素a的产生菌，根据高gc含量革兰氏阳性菌染色体复制起始区两端基因序列的保守性，采用pcr方法从该菌中克隆了一段包含染色体复制起始区(oric)的1.3kb片段。序列分析发现，克隆片段与天蓝色链霉菌的oric及邻近区域的同源性达80％以上；头状链轮丝菌oric中含有22个dnaa-box，保守序列为ttgtccaca。以克隆片段构建的质粒可以跨属转化变铅青链霉菌(s.lividans)zx7，原生质体转化效率为3.2×102个/μgdna；质粒在s.lividanszx7中能以低拷贝形式稳定存在；转化子的菌落和菌丝形态均正常。头状链轮丝菌oric序列与几种链霉菌的oric有较高的同源性，以及在变铅青链霉菌中仍具有复制起始活性等说明链轮丝菌属与链霉菌属在系统发生上关系较近；但采用最大似然法分析oric序列构建的头状链轮丝菌与几种链霉菌的系统进化树表明，头状链轮丝菌与几种链霉菌之间的分化距离远大于链霉菌之间的分化距离。该证据支持链轮丝菌属的独立分属。