蜜环菌胞外漆酶的合成、纯化及性质研究

研究了蜜环菌胞外漆酶合成条件和酶学性质。实验表明，培养基初始ph5.5、培养温度25℃有利于菌株产酶；与麦芽糖、山梨糖和半乳糖相比，纤维二糖和棉子糖作为碳源时漆酶产量更高；有机氮源比无机氮源有利于漆酶合成。泥炭提取液可显著诱导漆酶生成，当其含量为50%时，菌株漆酶最高产量是对照组的7倍。在蜜环菌发酵上清液中检测到3个漆酶同功酶组分，其主要活性（约占75%）组份漆酶a经(nh4)2so4沉淀、制备级page电泳和阴离子交换柱层析被分离纯化至电泳均一，sdspage法测得酶亚基分子量59kd，凝胶过滤色谱法测定活性酶分子量58kd。纯化的漆酶a等电点pi为4.0，氧化愈创木酚的最适反应ph为5.6，最适温度为60℃，在60℃和65℃时半衰期分别为45min和36.8min，在ph5.2～7.2范围内稳定性较好。100mmol/lcl-对该酶有显著抑制作用，1mmol/lso2-4对漆酶有激活作用，1mmol/lnan3可完全抑制酶活性，10mmol/ledta对漆酶活没有明显影响，1mmol/lcu2+对漆酶有激活作用。以愈创木酚为底物时，测得酶的km=1.026mmol/l，vmax=5μmol/(min·mg)；以abts为底物时，测得其km=0.22mmol/l，vmax=69μmol/(min·mg)。