表达大肠杆菌k88ac-st1-ltb融合蛋白基因工程菌株的构建

利用pcr技术，从大肠杆菌c83902质粒中扩增出k88ac基因、st1突变基因和ltb基因，通过分离、纯化、内切酶酶切、连接和转化，构建了含k88ac-st1-ltb融合基因表达载体的重组菌株bl21（de3）（pxkst3lt5）。经酶切鉴定和dna序列分析证实，构建的重组质粒pxkst3lt5中含有k88ac-st1-ltb融合基因，且基因序列和阅读框架均正确。经elisa检测，重组菌株表达的k88ac-st1-ltb融合蛋白能够被st1单抗、ltb和k88ac抗体识别。经乳鼠灌胃试验证实，表达的融合蛋白已丧失天然st1肠毒素的活性。免疫实验结果表明，k88ac-st1-ltb融合蛋白能够诱发小白鼠产生抗体，该抗体具有中和天然st1肠毒素的毒性作用，表明构建的重组菌株可以作为预防仔猪黄、白痢基因工程菌苗的候选菌株。