合成酮内酯类3-脱氧-3-羰基-红霉内酯b糖多孢红霉菌m的构建

大环内酯类抗生素基因工程是近年来研究的一个新领域，迄今已合成了100多种新的聚酮类化合物。以糖多孢红霉菌a226基因组dna为模板，用重叠pcr方法扩增出去除kr6酶域dna的约32kbdna片段，克隆于pwhm3载体，构建了同源重组质粒pwhm2201。peg介导原生质体转化法将pwhm2201转入糖多孢红霉菌a226，并整合于染色体红霉素合成基因位点。整合体在r3m斜面上生长两代后，制备原生质体涂r3m平皿。利用pcr鉴定筛选出8株kr6敲除的突变体糖多孢红霉菌m(1-8)。zabspecfab质谱鉴定，证实糖多孢红霉菌m1合成了3-脱氧-3-羰基-红霉内酯b，一种新的酮内酯类化合物。〖hj0