黄地老虎颗粒体病毒dna片段在枯草芽孢杆菌中的克隆和启动氯霉素抗性基因表达

黄地老虎颗粒体病毒(agrotissegetumgranulosisvirus简称asgv)dna和ppl603质粒dna，用限制性核酸内切酶ecori酶切后，再用t4连接酶连接，转化枯草芽孢杆菌brl51感受态细胞。然后在loμg／m1氯霉素的spby选择平皿上筛选，得到了抗氯霉素的转化子。经过琼脂糖凝胶电泳检测，转化于中的重组质粒比原载体ppl603质粒分子量大。由于重组质粒上的抗性表达水平可达250μg／m1氯霉素，比ppl603质粒抗性表达水平(5μg／m1)提高50倍。所以重组质粒携带了有启动作用的dna片段。启动功能片段的分子量，经琼脂糖凝胶电泳测定约为o．9kb。除进行dna—dna分子杂交确证外，并用重组质粒pasgvpl5进行了第二次转化、抗性水平测定和分子量分析。