青霉素酰化酶基因的克隆与表达ⅱ质粒ppal的限制性酶切图及青霉素酰化酶基因的定位

前文报道重组质粒ppal中9．1kb的ecori片段上带青霉酰化酶基因。用16种限制性内切酶消化ppal，其中apai，kpni，saci，saci，smai及xhoi等六种内切酶在ppal上无切口；bamhi，clai，sphi，bgli为单切口；sal为双切口，avai，hindi及pvui为三切口,ecorv为五切口。经交叉双酶解法测定各片段的大小，作出质粒ppal的限制性酶切图。在包含青霉素酰化酶基因的9．1kbecori片段上，bgli有一个切口，avai，hindi及pvui都有两个切口，而ecorv有四个切口，sali，bamhi，claiksphi不切9．1kb的eeori片段。hindi切9．1kbecori片段为a(3．5kb)，b(2．7kb)及c(2，9kb)等三个片段。经hindi部分水解后连接，转化大肠杆菌hb101得到一系列带不同hind1片段的质粒的转化子，青霉素酰化酶活性测定证明其基因位于hindii—a片段上。合成青霉素酰化酶仍需苯乙酸诱导，并被葡萄糖阻遏，hindi—b片段的存在能增加青霉素酰化酶基因的表达，而c片段无显著影响。