麦迪霉素产生菌酮基还原酶基因的研究

将麦迪霉素产生菌基因文库中与放线紫红索酮基还原酶基因actⅲ有同源性的4·0kbdna片段克隆到质粒载体pwhm3中，构成重组质粒pcb4。将质粒pcb4转入酮基还原酶基因缺陷菌株——加利利链霉菌atcc3167l中，得到转化子。转化子发酵产物经tlc和hplc分析证明是阿克拉菌酮，与加利利链霉菌原株atcc31133的产物相同，说明麦迪霉素产生菌酮基还原酶基因互补了加利利链霉菌atcc31671中缺陷的酮基还原酶基因，使其恢复了产生阿克拉菌酮的能力。4．okbdna片段插入方向相反的重组质粒pcbr4在加利利链霉菌atcc31671中发酵产物经tlc分析证明也是阿克拉菌酮，这说明4．0kbdna片段中麦迪霉素产生菌酮基还原酶基因具有自身的启动子。对4．0kbdna片段进行了限制酶酶切分析，建立了其酶切图谱。以actⅲ基因为探针，经分子杂交以及亚克隆和dna转化实验，将麦迪霉索产生菌酮基还原酶基因定位于bsshⅱ—bamhⅰ1．3kbdna片段上。对1．3kbdna片段核苷酸序列分析结果表明：此1．3kbdna片段中含有一个独立的orf，起始密码atg，终止密码tag，含783bp；在起始密码上游有ggagg5个核苷酸sd序列；此orf编码260个氨基酸，与actⅲ基因编码的261个氨基酸相似性为77．4%，相同性为66．7％，对麦迪霉素产生苗酮基还原酶基因的可能作用进行了讨论。