易于基因产物加工和快速纯化的融合表达载体

从proteina基因酶切分离出编码完整的结合igg的b、c区域(pabc)的相应dna片段，克隆进噬菌体m1乳通过人工合成寡聚核苷酸引物，突变修饰b、c区域内分别含有的羟胺裂解位点，变as-gly为asn—a1a。利用突变修饰后的pbacm编码基因片段，构建了一组含有不同阅读框架的融合蛋白表达载体。进一步分别重组克隆了含人工合成的人胰岛索样生长因子ⅰ(igf—ⅰ)、人和牛生长激素释放因子(grf)等基因的表达质粒，在大肠杆菌中高效表达出pabc—igf—l、pabc—hgrf、pabc-bgrf及其衍生型融合蛋白。经sds—page测定分析，每立升摇瓶的融合蛋白产量可达100mg以上。上述高效表达的pabc融合蛋白，通过固相亲和层析柱一步分离．获得sds—page鉴定为近均一分子量纯化的pabc融合表达产物。