杆状病毒转移载体的构建及绿色荧光蛋白在斜纹夜蛾幼虫中的表达

为构建斜纹夜蛾核型多角体病毒（spltmnpv）的重组病毒，以该病毒日本c3株基因组dna为pcr扩增模板，根据genbankspltmnpv中国g2株基因序列，设计了两对引物分别扩增多角体蛋白基因的5′端侧翼序列（含启动子）和3′端侧翼序列（含终止子），将这两个片段依次克隆于puc18质粒载体后，再将绿色荧光蛋白(gfp)基因亚克隆到上述载体的多角体蛋白基因启动子和终止子之间，获得转移载体psplt-gfp。将psplt-gfp与野生型spltmnpv基因组dna共转染spli细胞，通过同源重组和有限稀释法筛选，获得了以gfp基因替代多角体蛋白基因的重组病毒spltmnpv-gfp。spltmnpv-gfp感染spli细胞和斜纹夜蛾幼虫，分别在感染24h和48h后可发现绿色荧光蛋白的表达。该重组病毒的获得，为建立斜纹夜蛾核型多角体病毒表达体系奠定了基础。