代谢工程大肠杆菌利用甘油高效合成l-乳酸

以甘油为碳源高效合成l-乳酸有助于推进油脂水解产业和生物可降解材料制造业的共同发展。为此，首先分别从凝结芽胞杆菌bacilluscoagulanscicimb1821和大肠杆菌escherichiacolicicimb0013中克隆了l-乳酸脱氢酶基因bcoaldh和d-乳酸脱氢酶(ldha)的启动子片段pldha。将两条dna片段连接组成了表达盒pldha-bcoaldh。然后将上述表达盒通过同源重组删除fmn为辅酶的l-乳酸脱氢酶编码基因lldd的同时克隆入ldha基因缺失菌株e.colicicimb0013-080c(ack-ptappspflbdldpoxbadhefrdaldha)的染色体上，获得了l-乳酸高产菌株e.colicicimb0013-090b(b0013-080c，lldd::pldha-bcoaldh)。考察了菌株cicimb0013-090b不同培养温度下代谢利用甘油和合成l-乳酸的特征后，建立并优化了一种新型l-乳酸变温发酵工艺。在7l发酵罐上，发酵27h，积累l-乳酸132.4g/l，产酸强度4.90g/(l·h)，甘油到l-乳酸的得率为93.7％，l-乳酸的光学纯度达到99.95％。