烟曲霉β-葡萄糖苷酶的基因克隆、表达及酶学性质分析

探索获得优良的β-葡萄糖苷酶基因，对实现其工业化生产具有重要意义。烟曲霉aspergillusfumigatus基因组中含有一个bgl基因(1752bp)，编码的蛋白约65kda，推测为属于糖苷水解酶家族的β-葡萄糖苷酶。将bgl基因克隆并构建了重组表达载体pgex-bgl，转化大肠杆菌escherichiacolibl21(de3)，经iptg诱导获得表达。重组蛋白经亲和层析纯化后，以七叶苷为底物进行了酶学分析，结果表明该酶的最适温度是45℃，最适ph在5.5~6.0之间，对七叶苷的km值为17.7mmol/l。该酶在ph4~7范围内稳定；70℃保温2h后仍能保持60％的活性。金属离子和化学试剂对酶活性有不同程度的影响，ca2+对重组酶有轻微的激活作用，而sds可强烈抑制其活性。由于其相对于真菌来源的其他葡萄糖苷酶稳定性较高，为进一步的研究与应用奠定了基础。