液化沙雷氏菌磷脂酶a1的克隆表达及乳糖自诱导发酵

为了利用大肠杆菌高效生产重组磷脂酶，克隆了液化沙雷氏菌磷脂酶a1的编码基因pla，分别使用pet-28a(+)和pet-20b(+)载体，实现了磷脂酶a1在大肠杆菌bl21(de3)中的功能表达。重组菌利用载体pet-28a(+)在原始信号肽的介导下胞外pla1酶活达40.8u/ml，占总酶活的91％。重组菌转接至优化后的发酵诱导培养基：蛋白胨10g/l，酵母粉5g/l，葡萄糖0.8g/l，乳糖5g/l，25mmol/lna2hpo4，25mmol/lkh2po4和1mmol/lmgso4；菌体生长6h后，添加7.5g/l的甘氨酸，37℃恒温发酵24h，重组菌胞外pla1酶活达到128.7u/ml。