黄粉虫抗菌肽在大肠杆菌中表达条件优化及活性分析

为了提高黄粉虫抗菌肽基因tmamp1m在大肠杆菌中的表达量，研究了培养温度、诱导时间及iptg浓度等不同条件对his-tmamp1m融合蛋白表达量和活性的影响。通过tricine-sds-page分析确定最佳表达条件，同时，通过琼脂孔穴扩散法检测其抑菌活性。结果表明，含有重组质粒的大肠杆菌在37℃，使用终浓度为0.1mmol/liptg培养4h时，融合蛋白表达量较高，可占细菌总蛋白40％以上，抗菌活性最好。用ni2+亲和层析纯化获得较纯的融合蛋白，westernblotting分析表明其能与his单克隆抗体起特异性反应。诱导表达的融合蛋白对宿主菌生长产生一定程度抑制。融合蛋白经100℃煮沸10h，在?20℃反复冻融10次，与强酸强碱缓冲液、不同的有机溶剂和蛋白酶混合后都具有极强的稳定性，仍然表现出良好的抗菌活性。此外，最小抑菌浓度(mic)测定结果表明，融合蛋白对5种菌具有良好的抗菌活性。研究结果为昆虫抗菌肽推广应用和进一步研究奠定了基础。