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ISSN: 2333-9721
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一种新的dyp-type过氧化物酶在大肠杆菌中的重组表达、纯化及鉴定

, PP. 772-784

Keywords: dyp-type过氧化物酶,运动发酵单胞菌,亚铁血红素蛋白,表达纯化

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Abstract:

染料脱色过氧化物酶(dyp-type过氧化物酶)是含有亚铁血红素,能降解各种有毒染料的一类蛋白。为了研究运动发酵单胞菌zymomonasmobiliszm4(atcc31821)中一种新的dyp-type过氧化物酶的特点和功能,以z.mobilis基因组dna为模板,通过pcr扩增目的基因,克隆到大肠杆菌表达载体pet-21b(+)中。通过zmdyp与其他dyp-type过氧化物酶的比对,发现它们存在着共同保守氨基酸d149、r239、t254、f256和gxxdg结构基序,说明zmdyp是dyp-type过氧化物酶家族的一个新成员。经iptg诱导大肠杆菌中pet21b(+)-zmdyp表达,并将表达的酶进行金属螯合层析纯化。sds-page分析表明,纯酶分子量为36kda,而活性染色显示分子量为108kda,表明该酶在活性状态下可能是一个三聚体。光谱扫描显示zmdyp有一个典型的亚铁血红素吸收峰,说明它是含有亚铁血红素的蛋白。对zmdyp性质进行了研究,发现以2,2-二氨-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)abts为底物,zmdyp表现出更高的转化效率。这些研究结果丰富了dyp-type过氧化物酶家族信息,并且为zmdyp的结构功能和反应机制研究奠定了基础。

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