利用人工锌指文库选育高乙醇耐受性工业酵母菌株

选育高乙醇耐性的酿酒酵母菌株对提高燃料乙醇的发酵效率具有重要意义。锌指蛋白广泛存在于多种生物中，对基因的转录和翻译起重要的调节作用。利用人工设计的锌指蛋白可定向设计锌指序列及其排列顺序，实现对细胞内多个基因的全局调控。由于与环境胁迫反应相关的基因很多，因此可利用人工锌指蛋白技术获得耐受性提高的微生物重组菌。文中将人工锌指文库转入到酿酒酵母模式菌株s288c，选育了具有高乙醇耐受性的重组菌株m01，并分离了与乙醇耐受性提高相关的人工锌指蛋白表达载体prs316zfp-m01，转入工业酿酒酵母sc4126，在含有不同浓度乙醇的平板上，工业酵母sc4126的重组菌株表现出显著的耐受性提高。在高糖培养基(250g/l)条件下进行乙醇发酵，发现重组菌的乙醇发酵效率明显快于野生型，发酵时间提前24h，且发酵终点乙醇浓度提高6.3％。结果表明人工锌指文库能够提高酵母的乙醇耐受性，为构建发酵性能优良的酵母菌种奠定了基础。