荒漠甲虫小胸鳖甲抗冻蛋白的酵母表达及应用

昆虫抗冻蛋白(antifreezeprotein，afp)的抗冻活性很高，可应用于生物组织和细胞的低温保存。为了在酵母中表达荒漠甲虫小胸鳖甲microderapunctipennis抗冻蛋白mpafp698，并确定其在低温下的保护作用，本文通过构建真核表达载体ppic9k-mpafp698，转化巴斯德毕赤酵母gs115，诱导表达小胸鳖甲抗冻蛋白mpafp698。利用免疫印迹(westernblotting)分析mpafp698蛋白的特异性表达，结果显示mpafp698基因可整合到酵母基因组中并分泌表达，且酵母自身蛋白很少分泌表达。检测抗冻蛋白的低温保护作用，结果发现，小胸鳖甲抗冻蛋白可显著改善冷冻小鼠肝脏等器官的细胞形态，降低血细胞在4℃的溶血率，提高sf9细胞冻融后的存活率。本研究表明，小胸鳖甲afp可以在毕赤酵母中分泌表达，便于纯化，有良好的低温保护效果。