基于soe-pcr的两种鱼类hepcidin基因串联及其在毕赤酵母中的表达

hepcidin抗菌肽是由生物肝脏细胞表达的一类具有抗菌作用和铁代谢调节功能的碱性小分子肽，它们在机体免疫系统中发挥了重要作用，被认为是抗生素的理想替代品。通过重组dna表达技术制备抗菌肽无疑是一条良好的途径。为扩大hepcidin的抗菌谱和提高其表达量，通过soe-pcr将斑点叉尾鮰ictaluruspunctatushepcidin成熟肽的cdna“mch”与尼罗罗非鱼oreochromisniloticushepcidin成熟肽的cdna“mth”进行串联，并在两端分别添加ecorⅰ和notⅰ酶切位点，以ppic9k为真核表达载体，成功构建了“ppic9k-mch-mth”重组表达载体；电转化进毕赤酵母gs115中，经不同浓度g418和选择性培养基筛选以及对酵母基因组dna的pcr鉴定，得到高拷贝酵母转化子；在30℃、以1%的甲醇诱导表达不同时间后，经tricine-sds-page分析，表明发酵培养72h时目的蛋白的表达量最高，达77mg/l。发酵上清经sp-sepharose阳离子交换层析纯化后获得高纯度的目的蛋白。抑菌实验显示含目的蛋白的发酵上清和经纯化后的重组目的蛋白对革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌都有良好的抑菌效果。本研究结果为hepcidin抗菌肽的产业化生产奠定了良好的基础。