丙型肝炎病毒ns3蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

提高对丙型肝炎患者实验室检测的灵敏度和特异性，对相关人群进行筛查和早期诊断，是控制丙型肝炎病毒(hcv)流行与传播的有效措施。为了建立更为可靠的hcv诊断方法，通过采用pcr方法从j6/jfh12a型病毒中克隆出hcvns3基因片段，将其连接到pet-28a载体上，重组载体pet-28a-ns3转化大肠杆菌bl21(de3)后诱导表达，以10%sds-page进行鉴定，获得表达的ns3重组蛋白分子量为72kda。将纯化的ns3蛋白免疫balb/c小鼠，第4次免疫后采集血液并分离血清进行抗体活性鉴定，小鼠抗体效价为1∶256000。进一步的westernblotting和间接免疫荧光结果显示，以重组ns3蛋白免疫小鼠制备的多克隆抗体可以很好地识别hcv感染huh7.5.1细胞中的ns3蛋白，为下一步开展单克隆抗体制备和检测试剂盒研制工作奠定了基础。