农杆菌介导的墨兰遗传转化

转基因育种是快速定向改良兰花育种目标性状的有效方法，但迄今未见有关墨兰转基因育种的研究报道。试验以‘企剑白墨’墨兰cymbidiumsinensiscv.‘qijianbaimo’的根状茎为受体材料，研究了影响农杆菌介导墨兰遗传转化效率的因素，以建立有实用价值的墨兰遗传转化技术体系。结果表明，受体的预培养时间、乙酰丁香酮的添加方式及浓度、农杆菌工程菌液浓度(od600)、侵染时间和共培养时间均对‘企剑白墨’根状茎的gus瞬时表达率有显著影响。以预培养39d的根状茎尖为材料，在添加200μmol/l乙酰丁香酮，od600为0.9的工程菌液中侵染35min后，转入添加200μmol/l乙酰丁香酮的共培养基中培养7d时，‘企剑白墨’根状茎的gus瞬时表达率最高，为11.67%。采用上述条件对‘企剑白墨’墨兰进行遗传转化，经pcr鉴定和gus染色检测，从400株再生植株中获得了3株转基因植株，转化率为0.75%。研究表明通过农杆菌介导法对墨兰进行遗传改良是可行的。