黑曲霉qu10果糖基转移酶的克隆表达

微生物果糖基转移酶能够以蔗糖为底物产生低聚果糖。为获得更多新酶资源，通过pcr法成功地克隆出黑曲霉qu10的果糖基转移酶基因（genbankaccessionno.kf699529），基因片段长度为1941bp，包含一个54bp的内含子。进一步利用rt-pcr法克隆了果糖基转移酶的cdna，其编码628个氨基酸。将所得片段定向克隆到pet-22b、pgapza及pgapzαa载体，并转化至大肠杆菌或毕赤酵母中，通过筛选获得果糖基转移酶表达活力高的转化子。利用α信号肽的毕赤酵母转化子获得最高果糖基转移酶胞外酶活力为431u/ml，是原始菌株酶活力的35倍。此毕赤酵母重组酶为同源二聚体，半天然page表观分子量约200kda。以蔗糖为底物，果糖基转移酶在ph5.0、45℃下反应4h，酶解产物中主要是蔗果三糖和四糖，蔗果寡糖最高可占总质量的58%。结果表明，果糖基转移酶酵母工程菌具有很高的转果糖基的能力，而且表达活力高，具有潜在的工业应用价值。