日本血吸虫sjost48基因的克隆、表达及其重组蛋白免疫保护效果分析

为了鉴定日本血吸虫sjchgc01743基因并评估其重组蛋白作为新的血吸虫病候选疫苗抗原的潜力，利用pcr技术扩增日本血吸虫sjchgc01743基因，应用荧光实时定量pcr分析该基因在日本血吸虫不同发育阶段虫体的转录水平，以pet-28a(+)为载体构建重组表达质粒并诱导其在大肠杆菌中表达。将纯化的重组蛋白免疫balb/c小鼠制备免疫血清，利用westernblotting检测重组蛋白的免疫原性，应用间接免疫荧光技术对sjchgc01743进行蛋白组织定位，利用间接elisa方法检测小鼠血清中特异性抗体水平。将重组抗原免疫小鼠，评估其免疫保护效果。pcr扩增得到1248bp不含信号肽的cdna序列，同源性分析结果显示，该基因为日本血吸虫寡糖转移酶ost48亚基，命名为sjost48。实时定量pcr分析显示sjost48在检测的童虫和成虫各个期别虫体中均有转录，其中在28d虫体中的转录水平最高，在42d雌虫中的转录量显著高于雄虫。构建的重组表达质粒pet-28a(+)-sjost48成功在大肠杆菌中表达，重组蛋白rsjost48分子量约50kda。westernblotting分析表明rsjost48能被小鼠免疫血清识别，具有良好的免疫原性，间接免疫荧光实验表明sjost48蛋白主要分布于虫体体被，少量分布于实质。elisa检测结果表明rsjost48能诱导产生较高的特异性igg、igg1和igg2a抗体。动物免疫保护实验结果表明sjost48能诱导小鼠产生32.62%(p<0.05)的减虫率及57.61%(p<0.01)的肝脏减卵率。本研究为深入探讨日本血吸虫sjost48基因的生物学功能及筛选新的血吸虫疫苗候选分子奠定了基础。