几种新型植物基因表达载体的构建方法

利用基因工程技术手段研究基因功能过程中，构建基因表达载体处于转基因植物的主导地位，采用合适的构建方法会使实验效果事半功倍。植物基因表达载体的构建方法除了传统构建法、gateway技术、三段t-dna法、一步克隆法等，还有近年来出现的几种新型的载体构建方法：基于竞争性连接原理快速构建小片段基因表达载体；microrna前体pcr置换法适用于构建小分子rna表达载体；重组融合pcr法特别适用于插入片段中含有较多限制性酶切位点的载体构建；利用in-fusion试剂盒可以将任何目的片段插入一个线性化载体的某个区域；构建多片段复杂载体可采用不依赖序列和连接的克隆方法(sequenceandligation-independentcloning,slic)法；gibson等温拼接法；goldengate拼接法。本文将在总结分析前人工作的基础上，结合自己工作的体会和经验分析这7种新方法的特点，期望通过这几种新的方法给植物基因工程表达载体的构建提供新的思路。